本發(fā)明涉及農(nóng)業(yè)生物，尤其涉及重樓皂苷h在制備抗核盤(pán)菌藥劑、農(nóng)業(yè)殺菌劑中的應(yīng)用。

背景技術(shù)：

1、重樓屬(paris)植物是傳統(tǒng)中藥“重樓”的來(lái)源，其甾體皂苷類(lèi)成分具有抗菌、抗炎等多種生物活性?，F(xiàn)代藥理研究表明，重樓屬植物可用于鼻咽癌、肺癌、胃癌、肝癌、乳腺癌、子宮肌瘤、白血病等疾病的治療，其抑制腫瘤細(xì)胞的機(jī)制可能與調(diào)節(jié)細(xì)胞凋亡相關(guān)蛋白的表達(dá)、改變與腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)的相關(guān)蛋白活性、抑制腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)周期及其內(nèi)皮細(xì)胞的遷移和毛細(xì)血管形成等有關(guān)。

2、核盤(pán)菌(sclerotinia?sclerotiorum)是一種嚴(yán)重危害農(nóng)作物的病原真菌，可侵染油菜、大豆等400余種植物，導(dǎo)致苗期猝倒、莖腐和貯藏期腐爛，造成顯著經(jīng)濟(jì)損失。目前，化學(xué)殺菌劑是防治核盤(pán)菌的主要手段，但長(zhǎng)期使用易導(dǎo)致抗藥性、環(huán)境污染和農(nóng)藥殘留等問(wèn)題。因此，開(kāi)發(fā)環(huán)境友好的新型抗真菌藥劑具有重要意義。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、本發(fā)明所要解決的技術(shù)問(wèn)題是開(kāi)發(fā)一種來(lái)源于重樓植物的抗真菌藥劑，尤其是抗核盤(pán)菌。

2、為了解決上述問(wèn)題，本發(fā)明提出以下技術(shù)方案：

3、第一方面，本發(fā)明提供重樓皂苷h在制備抗核盤(pán)菌藥劑、農(nóng)業(yè)殺菌劑中的應(yīng)用，所述重樓皂苷h的分子式為c44h70o17，化學(xué)結(jié)構(gòu)如式1所示：

4、

5、第二方面，本發(fā)明提供一種抗核盤(pán)菌藥劑，包括重樓皂苷h且以重樓皂苷h為活性成份。

6、進(jìn)一步地，所述抗核盤(pán)菌藥劑中，重樓皂苷h的濃度為4-200mg/l。

7、進(jìn)一步地，所述抗核盤(pán)菌藥劑還包括農(nóng)業(yè)上可接受的賦形劑或載體。

8、第三方面，本發(fā)明提供一種殺菌組合物，所述殺菌組合物含有活性成份重樓皂苷h，所述殺菌組合物用于防治由核盤(pán)菌屬引起的病害。

9、進(jìn)一步地，所述殺菌組合物中，重樓皂苷h的濃度為4-200mg/l。

10、按照本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的方法，本發(fā)明所述的殺菌組合物或抗核盤(pán)菌藥劑在實(shí)際應(yīng)用時(shí)可配制成農(nóng)業(yè)上允許的任意劑型，例如水分散粒劑、懸浮劑、可濕性粉劑、微乳劑、水乳劑。

11、對(duì)水分散粒劑，可選的助劑包括：分散劑選用自聚羧酸鹽、木質(zhì)素磺酸鹽、烷基萘磺酸鹽；潤(rùn)濕劑選自聚氧乙烯醇、烷基硫酸鹽、烷基磺酸鹽、萘磺酸鹽；崩解劑選自硫酸銨、尿素、蔗糖、葡萄糖、氯化鋁、檸檬酸、丁二酸、碳酸氫鈉；粘結(jié)劑選自硅藻土、玉米淀粉、pva、羧甲基(乙基)纖維素類(lèi)；填料選自硅藻土、高嶺土、白炭黑、輕鈣、海泡石、滑石粉、凹凸棒土、陶土。

12、對(duì)可濕性粉劑，可選的助劑包括：分散劑選自聚羧酸鹽、木質(zhì)素磺酸鹽、烷基萘磺酸鹽；潤(rùn)濕劑選自烷基硫酸鹽、烷基磺酸鹽、萘磺酸鹽；填料選自硫酸銨、尿素、蔗糖、葡萄糖、硅藻土、高嶺土、白炭黑、輕鈣、滑石粉、凹凸棒土、陶土。

13、對(duì)懸浮劑，可選的助劑包括：分散劑選自聚羧酸鹽、木質(zhì)素磺酸鹽、烷基萘磺酸鹽、tersperse?2425(美國(guó)亨斯邁公司出品，烷基萘磺酸鹽類(lèi))；乳化劑選自農(nóng)乳700#(通用名：烷基酚甲醛樹(shù)脂聚氧乙烯醚)、農(nóng)乳2201、斯盤(pán)-60#(通用名：山梨醇酐單硬脂酸酯)、乳化劑t-60(通用名：失水山梨醇單硬脂酸酯聚氧乙烯醚)、農(nóng)乳1601#(通用名：苯乙基苯酚聚氧乙烯聚氧丙烯醚)、tersperse4894(美國(guó)亨斯邁公司出品)；潤(rùn)濕劑選自烷基酚聚氧乙烯聚基醚甲醛縮合物硫酸鹽、烷基酚聚氧乙烯基醚磷酸酯、苯乙基酚聚氧乙烯基醚磷酸酯、烷基硫酸鹽、烷基磺酸鹽、萘磺酸鹽、tersperse?2500(美國(guó)亨斯邁公司出品)；增稠劑選自黃原膠、聚乙烯醇、膨潤(rùn)土；防腐劑選自甲醛、苯甲酸、苯甲酸鈉；消泡劑為有機(jī)硅類(lèi)消泡劑；防凍劑選自乙二醇、丙二醇、甘油、尿素、無(wú)機(jī)鹽類(lèi)如氯化鈉。

14、對(duì)水乳劑，可選的助劑包括：乳化劑選自壬基酚聚氧乙烯(eo＝10)醚磷酸酯、三苯乙基苯酚聚氧乙烯醚磷酸酯(農(nóng)乳600#磷酸酯)、農(nóng)乳700#、農(nóng)乳2201#、span-60#、乳化劑t-60、tx-10、農(nóng)乳1601#、農(nóng)乳600#、農(nóng)乳400#；溶劑選自二甲苯、甲苯、環(huán)己酮、溶劑油(牌號(hào)：s-150、s-180、s-200)；穩(wěn)定劑選自亞磷酸三苯酯、環(huán)氧氯丙烷、醋酐；防凍劑選自乙二醇、丙二醇、甘油、尿素、無(wú)機(jī)鹽類(lèi)如氯化鈉；增稠劑選自黃原膠、聚乙烯醇、膨潤(rùn)土、硅酸鎂鋁；防腐劑選自甲醇、苯甲酸、苯甲酸鈉。

15、對(duì)微乳劑，可選的助劑包括：乳化劑選自十二烷基苯磺酸鈣(農(nóng)乳500#)、農(nóng)乳700#、農(nóng)乳2201#、斯盤(pán)-60#、吐溫-80-60#、tx-10、農(nóng)乳1601、農(nóng)乳600#、農(nóng)乳400#；助乳化劑選自甲醇、異丙醇、正丁醇、乙醇；溶劑選自環(huán)己酮、n-甲基吡咯烷酮、二甲苯、甲苯、溶劑油(牌號(hào)：s-150、s-180、s-200)；穩(wěn)定劑選自亞磷酸三苯酯、環(huán)氧氯丙烷。

16、本發(fā)明所述的殺菌組合物或所述的抗核盤(pán)菌藥劑可以以成品制劑形式提供，即組合物中各物質(zhì)已經(jīng)混合；也可以以單劑制劑提供，使用前在桶(罐)中直接混合。本發(fā)明的濃縮物通常與水混合得到所需要活性物質(zhì)的濃度。

17、本發(fā)明所述的殺菌組合物或抗核盤(pán)菌藥劑可用于防治包括核盤(pán)菌屬等引起的重要病害。本發(fā)明所述的殺菌組合物的施用場(chǎng)所為農(nóng)田、果園等。

18、本發(fā)明還提供了一種殺菌的方法，在作物和/或果實(shí)感病之前或之后，向作物和/或果實(shí)及其生長(zhǎng)或儲(chǔ)存的場(chǎng)所施用本發(fā)明的組合物或抗核盤(pán)菌藥劑?？梢园雌胀ǖ姆椒ㄊ┯茫鐫沧?、噴射、噴霧、撒粉、散布。本發(fā)明所述的殺菌組合物或抗核盤(pán)菌藥劑的施用量隨天氣條件或作物狀態(tài)變化。保護(hù)作用的持續(xù)時(shí)間通常與組合物中單個(gè)化合物的含量有關(guān)，與外界因素相關(guān)，例如氣候，但通過(guò)使用適當(dāng)?shù)膭┬涂梢詼p緩氣候的影響。

19、本發(fā)明還提供一種重樓皂苷h的制備方法，以啟良重樓為原料進(jìn)行制備。

20、該制備方法包括以下步驟:

21、啟良重樓干燥根莖粉碎后，用65-80％乙醇冷浸提取2-4次，每次20-30小時(shí)，過(guò)濾后，減壓回收乙醇，得浸膏；

22、將所述浸膏加入水后混勻，依次用等體積的石油醚、二氯甲烷、乙酸乙酯和正丁醇進(jìn)行分配萃??；減壓除去溶劑得到五個(gè)主要部分：pe部分、dcm部分、ea部分、n-buoh部分和水相殘留物；

23、將ea部分經(jīng)ods-a-hg柱層析，按甲醇/水體積比為45：55，50：50，55：45，60：40，65：35，70：30，75：25，80：20，85：15，90：10，95：5，100：0進(jìn)行梯度洗脫，tlc檢測(cè)合并相同餾分，得到fr.c1--c11共11個(gè)餾分段；

24、將fr.c8餾分再經(jīng)硅膠柱層析化段，二氯甲烷/甲醇體積比20：1，15：1，12：1，10：1，8：1，6：1，3：1進(jìn)行梯度洗脫，合并得到6個(gè)餾分段，fr.c8.1-c8.6；

25、將fr.c8.5再經(jīng)硅膠柱層析化段，二氯甲烷/甲醇體積比15：1，12：1，10：1，8：1，6：1，4：1，3：1進(jìn)行梯度洗脫，合并得到7個(gè)餾分段，fr.c8.5.1-c8.5.7；

26、將fr.c8.5.4經(jīng)sephadex?lh-20柱層析分離，甲醇洗脫，合并得到高純度重樓皂苷h。

27、啟良重樓(paris?qiliangiana)是2017年發(fā)現(xiàn)的重樓屬新物種[yang,j.,wang,y.h.,li,h.paris?qiliangiana(melanthiaceae),a?new?species?from?hubei,china[j].phytotaxa,2017,329,193–196.]，但其化學(xué)成分和生物活性尚未被系統(tǒng)研究。相同的提取工藝下，相比于其他重樓屬植物，本發(fā)明首次從啟良重樓中分離得到高純度、高含量的重樓皂苷h。

28、與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明所能達(dá)到的技術(shù)效果包括：

29、本發(fā)明發(fā)現(xiàn)了重樓皂苷h具有強(qiáng)效抗核盤(pán)菌活性的作用，并提供重樓皂苷h在制備抗核盤(pán)菌藥劑、農(nóng)業(yè)殺菌劑中的應(yīng)用，為開(kāi)發(fā)天然來(lái)源的抗真菌藥劑提供了新的技術(shù)方案。

30、本發(fā)明首次公開(kāi)了從啟良重樓中快速大量提取分離化合物重樓皂苷h的制備方法，啟良重樓作為重樓屬新資源，其皂苷類(lèi)成分的開(kāi)發(fā)有望推動(dòng)農(nóng)業(yè)綠色防控技術(shù)的發(fā)展。